Мир Микроскопии : Вопросы и ответы

Егорова Ольга Владимировна : Вопросы по микроскопии
На все вопросы по микроскопии, методам контрастирования и настройке микроскопов всех типов ответит, а также даст рекомендации по переоснащению и разовым закупкам оптического оборудования кандидат технических наук, эксперт Госстандарта РФ по оптическому приборостроению, член Нью-Йоркской Академии наук, автор серии книг "С микроскопом на "ты" , "Шаг в ХХI век " и "Техническая микроскопия", а также соавтор книг "Компьютерная микроскопия" (Пантелеев В.Г и др.), "Основы цитологической диагностики и микроскопическая техника" (Полонская Н.Ю.), "Световой микроскоп как инструмент в биотехнологии растений" (Круглова Н.Н. и др.), автор более 200 статей по микроскопии и более 10 авторских свидетельств по объективам микроскопа (в соавторстве) ЕГОРОВА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА, (Санкт-Петербург).
16.07.2021 21:58, Евгений , Чаплыгин
Здравствуйте Ольга Владимировна. Весь инет перекопал так и не нашёл ничего про объективы ЛОМО F-4,3 0.5 и F-8,2 0.37 Какое у них увеличение? нашёл только F-13.9 0.30 у него линейное увеличение, 18 крат. можно ли эти объективы использовать для наблюдения за бактериями типа сенная палочка, и за грибами типа триходерма. так как эти объективы вроде от металлографиче ских микроскопов, а первый похоже надо использовать с какой то жидкостью для иммерсии.

Ответ
Объективы действительно от металлографических микроскопов , работают без покровного стекла, с высотой 33 мм и 29 мм. Увеличение объектива определяется тубусной линзой . У нас   для металлографических микроскопов было два типа тубусных линз — 200 мм и 250 мм. Увеличение рассчитывается следующим образом: фокусное расстояние тубусной линзы надо разделить на фокусное расстояние объектива.  F-4,3 А=0.5 (шифр ОС-42; рр-0,74; высота  29 мм;   Fтл 200 мм — ув. 46х; Fтл 250 мм — ув. 58х) F-8,2 А=0.37 (шифр ОС-41; рр-2,68; высота  29 мм;   Fтл 200 мм — ув. 24х; Fтл 250 мм — ув. 30х) F-13.9 А=0.30 (шифр ОХ14; рр-5,74; высота  33 мм;   Fтл 200 мм — ув. 14х; Fтл 250 мм — ув. 18х) Все объективы сухие (безыммерсионные). Нет, эти объективы  не предназначены для работы с препаратами , покрытыми покровным стеклом, или с объектами,  находящимися в слои жидкости.
06.06.2021 21:44, Роман, Мелитополь
Доброго времени суток, Ольга Владимировна. Ситуация в двух словах: имеется биологический бинокулярный микроскоп с встроенным галогенным освещением. Один из окуляров - иммерсионный Plan 100х oil, соответветстве нно стал вопрос покупки иммерсионного масла. Но столкнулся с тем, что в интернете в продаже масло есть двух видов: Флуоресцирующе е (100 мл, 40 мл) и Нефлуоресцирующее (10 мл). Нефлуоресцирующее доступно к покупке непосредственно в моем городе. Собственно вопросы: - какое масло лучше использовать для стандартных наблюдений; - можно ли вообще применять нефлуоресцирующее масло для обычных наблюдений в светлом поле проходящего света.

Ответ
Речь, насколько я понимаю, идёт о том, что иммерсионному ОБЪЕКТИВУ требуется масляная иммерсия. Масляная иммерсия бывает двух типов: 1) основное масло для светлопольной микроскопии -  Синтетическая  иммерсионная смесь для световой микроскопии Immersol 518N (показатель преломления: 1.518 при температуре 23 ° С, европейский стандарт DIN 58.884 и ISO 8036-1) ,  используется с галогенными или светодиодными осветителями; 2) нефлуоресцирующее масло для люминесцентной микроскопии - Синтетическая   иммерсионная смесь для люминесцентной микроскопии Immersol 518F (показатель преломления — 1.518 при температуре 23 °С) c низким уровнем собственной автофлуоресценции (без создания дополнительной фоновой засветки). Как видим, параметры практически одинаковые. Если в обычной светлопольной микроскопии с разными методами контрастирования можно пользоваться обоими типами  масла, то при работе с ртутной лампой и блоками люминесцентных светофильтров необходимо пользоваться только нефлуоресцирующим маслом.  Необходимо помнить, что оба типа масло должны строго соответствовать стандарту. В противном случае, качество изображения будет неудовлетворительным (вуаль, нечёткость изображения и возможен вариант токсичности масла, что может влиять на состояние здоровья лаборантов). 
27.03.2021 21:21, Мурид, Нальчик
Уважаемая Ольга Владимировна, здравствуйте! Первым делом, желаю Вам крепкого здоровья и бесконечных успехов в любом деле! Теперь позволю себе задать Вам вопрос. Мое хобби аквариумистика , где существует много разных инфекционных заболеваний. К сожалению, без точного изучения материала не всегда удается выявить конкретно болезнь, т.к. многие из них имеют схожие симптомы. Подойдет ли микроскоп "Микромед Р-1 LED" , для визуализации возбудителей болезней аквариумных рыб (препарация,ср езы,мазки)? Спасибо.

Ответ
Спасибо за добрые слова. И я  желаю вам здоровья и всей вашей семье тоже. Комплекта объективов и окуляров вполне будет достаточно для наблюдения ваших объектов. К тому же есть возможность дооснащения  комплектом окуляров (5х и 20х и для измерения — 10х/18 со шкалой, сеткой или перекрестием), а также видеоокуляром.  Правда, объективы-ахроматы, но и объекты у вас не совсем плоские. Контролируйте освещение — и всё должно быть в порядке.
25.03.2021 22:21, Алена Сковороднева, Курск
Здравствуйте, Ольга Владимировна! Подскажите, пожалуйста, возможно ли использование люминесцентного микроскопа Axio Imager M2 марки Zeiss для просмотра препаратов в проходящем и отраженном свете ? Не будут ли смешиваться масла (чем тогда лучше протирать объектив при смене масла) и теряться резкость изображения? И как произвести настройку микроскопа в таком случае? Заранее спасибо.

Ответ
Я правильно поняла, что вы используете микроскоп для металлографии Zeiss Axio Imager M2 в люминесцентном варианте для биологических исследований в проходящем свете и в отражённом свете люминесценции и вас беспокоит вопрос: если вы будите смотреть иммерсионный объектив в проходящем свете, с обычным маслом, а затем захотите исследовать препарат в свете люминесценции с использованием нелюминесцирующего (специального) масла, то испортится ли изображение. Отвечаю: 1) если вы будите смотреть в таком порядке, то возможно появление влияния обычного масла на изображение в свете люминесценции (появление дополнительной фоновой засветки - снижение контраста и слабый сигнал может быть не зафиксирован). 2) Если сначала будет использоваться нелюминесцирующее масло, а затем вы захотите смотреть в обычном проходящем свете - ничего страшного не произойдёт: изображение в проходящем свете будет нормальным и для работы достаточно просто смотреть дальше или протереть препарат и фронтальную линзу. В первом варианте требуется протереть спиртом не только поверхность препарата, но и вычистить фронтальную линзу.
15.03.2021 20:20, Дмитрий, Киев
Уважаемая Ольга Владимировна, здравствуйте! У меня два вопроса к Вам. Первый вопрос: для микроскопа Axio lad A1 есть промежуточная пластина Intermediate plate Axio Lab.A1 for tubes Item no.: 423732-9040-00 0, чтобы окуляры были выше для удобства наблюдения. Но я не смог найти толщину этой пластины. Мне не хватает около 4-х сантиметров для удобного наблюдения с прямой спиной и опущенными плечами, а подкладывать что-то под микроскоп плохо для кистей рук. Так вот, Не могли бы Вы подсказать толщину пластины и можно ли поставить сразу две такие пластины, без потери качества картинки?(я где-то читал, что можно, но не уверен) Второй вопрос: В лаборатории хотят ввести FISH-методику, купив для этого флуоресцентный модуль со светофильтрами к микроскопу Olimpus CX41. Я понимаю, что еще необходима будет камера, программа обработки изображения, может еще желательно иметь объективы лучшей коррекции, нежели стандартные. Не могли бы Вы сказать, будет ли успешной такая "конструкция" и посоветовать камеру, программу обработки изображения, может объективы и что-то еще важное на Ваш взгляд. С уважением, Дмитрий Кусков.

Ответ
По первому вопросу могу ответить, что в принципе промежуточный тубус может быть установлен между штативом и бинокулярной насадкой без ухудшения качества изображения, т.к. там параллельный ход лучей. Толщина порядка 5 см. Можно ли поставить две - это надо уточнять по номеру штатива. Главное, чтобы хватило света. У вас в Киеве есть филиал Цейсс : обратитесь туда с номером штатива. Касаемо второго вопроса. Olympus СХ41 два года, как снят с производства. Известно, что люминесцентный блок имеет 2 широкополосных люминесцентных блока с 50Вт ртутной лампой. Для ФИШ-анализа это минимальный набор - скорее для визуального анализа.  Для Фиш обычно камера монохромная, программа специальная для цветной визуализации сигналов . Но микроскоп простоват . Надо бы иметь лабораторный класс, а не рабочий, тогда и с оптикой можно не заморачиваться: в микроскопах серии ВХ хорошая оптика. 
18.02.2021 00:06, Фатых, из Ташкента
Здравствуйте. Помогите ответить на вопрос. Вы работаете на микроскопе и не можете рассмотреть микроскопический препарат?

Ответ
Причин может быть много. Вот некоторые из них: Грязная оптика объектива и окуляра; Не соблюдение правил микроскопирования (неправильно приготовлен препарат; масло имеет не  соответствующие ГОСТ параметры; отсутствие покровного стекла или оно слишком толстое); Не настроена осветительная система, что снижает разрешение Микроскоп не соответствует требованию по разрешению и контрасту для наблюдения конкретного объекта (возможно нужен соответствующий метод контрастирования — фазовый контраст, тёмное поле, поляризация, люминесценция). Рекомендую вам купить в июне-июле мою книгу  Егорова О.В. Физико-химические методы исследования и техника лабораторных  работ. Основы микроскопии. Учебное пособие. Михалева Вера Леонидовна, заведующая редакцией литературы по медицине, спорту и туризму издательства "ЛАНЬ". 196105, Санкт-Петербург, пр. Юрия Гагарина, д. 1, лит. А Тел.: (812)412-9272, (812)336-2509, (812)336-9092 Сот. Тел. +7(981)792-32-28 Тел.(бесплатная линия): (800)700-4071 Факс : (812)336-25-09 Internet: http://www.lanbook.com/ e-mail: med@lanbook.ru
17.02.2021 04:33, Дмитрий , Калининград
Подскажите какой микроскоп выбрать для палинологического анализа: 1.Primo Star (ZEISS), тринокулярная версия + Видеоокуляр ToupCam 5.1 MP (5,1Мп, ПО) 2.Тринокулярный микроскоп МИКРОМЕД-2 вариант 3-20 + Видеоокуляр ToupCam 5.1 MP (5,1Мп, ПО) 3.Микроскоп тринокулярный Микромед-3 вар.3-20М + Видеоокуляр ToupCam 5.1 MP (5,1Мп, ПО)  

Ответ
После дополнительной переписки и уточнения мы пришли к выводу, что Primo Star (ZEISS), тринокулярная версия + Видеоокуляр ToupCam 5.1 MP (5,1Мп, ПО) лучше всего подойдёт. На видеовыход будет установлен цифровой фотоаппарат.
16.02.2021 15:29, Анна Васильева, Москва
Уважаемая Ольга Владимировна! Подскажите, пожалуйста, какой микроскоп лучше выбрать. Выбор между Левенгук 400 и Микромед 2-20. Работа преимущественно на увеличении 200 (об.х20), объект - микроскопические клещи домашней пыли. Главные требования к микроскопу- качество оптики и надёжность,т.к. не известно, когда нам снова дадут бюджетные деньги на оборудование)))) Заранее спасибо. С уважением, Анна

Ответ
Я посмотрела оба микроскопа — что в лоб, что по лбу. Единственное ни тот , ни другой не имеют в своём комплекте объектив 20х. Может быть я, правда смотрю не на тех сайтах — пришлите тогда, п-ста, ссылки. И приблизительный бюджет. Я попробую поискать
11.02.2021 14:24, Вячеслав, Москва
Добрый день, Ольга Владимировна! Я случайно на сайте фирмы Motic обнаружил у них наличие комплекта планапохроматических объективов. Вот ссылка: https://moticeurope.com/en/ccis-plan-apochromat-objective-pl-apo-20x-065-wd07mm.html Хотелось бы узнать ваше мнение о них. Вы раньше вроде тестировали микроскопы этой фирмы. Не тестировали ли Вы данные объективы? И еще вопрос общего плана. Неужели сейчас мы достигли таких возможностей в плане технологий, что любая более менее серьезная компания может рассчитать и изготовить свой набор планапохроматических объективов? Ведь это задача сложная.Или я отстал от жизни и это стало уже рутиной? С уважением, Вячеслав

Ответ
Вы знаете, разработкой по-прежнему занимаются 5-7 ведущих фирм- разработчиков, но первенство всё равно принадлежит 4 ведущим фирмам. Мы говорим об объективах высших категорий не только по типу оптической коррекции, но и дифракционному качеству изображения, включающее такие составляющие, как частотно-контрастные характеристики, учитывающие контраст и разрешение системы. Всё это напрямую связано с качеством оптического стекла (однородностью, например) и его параметрами (показателем преломления и частной дисперсией, т.е. с заводами-производителями оптического стекла), а также пропусканием в определённом спектральном диапазоне. В то же время важную роль играет технология производства, как оптических деталей, так и механических, а также сборка самих объективов. Сюда входят высокоточные станки по изготовлению, по центрировке оптических поверхностей и оптических узлов, приборы для склейки, а также    приборы контроля. Чем выше технология тем ближе она к расчёту оптической системы и тем выше стоимость. Чем ниже уровень технологии и технологической дисциплины, тем дифракционное качество оптической системы ниже, тем и цена ниже. Вот вам и ответ на ваш вопрос. Если все высокоточные  признаки сложить во едино, то можно   получить высококачественный дорогой объектив . Высококачественное  и экспериментальное производства с применением новых технологий и материалов (как, например, у Nikon)   , мы уже знаем, есть у четырёх ведущих фирм. Недаром у них существуют полуапохроматы (например, Plan — Neofluar или  флюоритовые системы) относительно дешёвые и  апохроматы (Plan APO) — дорогие.   Второй эшелон развивающихся фирм возглавляет китайская фирма Motic.  У них свои разработчики и оборудование, правда,  пока  на класс ниже. По качеству изображения их апохроматы скорее относятся к полуапохроматам. Но вы знаете, для повседневных медико-биологическим исследований  они вполне подойдут. С другой стороны, вы ведь захотите работать с камерой, поэтому стоит учитывать и её цветопередачу, т.е. параметры   камеры. Учтите, фирмы типа Meiji , Levenhuk  и т.д. тоже выпускают планапохроматы , но их качество изображения чуть ниже, чем у Motic . Есть такой нестандартный термин — « чистое изображение», связанное с рассеянным светом, так вот объективы ведущих фирм обладают «чистым», «бриллиантовым» изображением.   И вообще настоящие  планапохроматы, обладающие, сверхвысокими числовыми апертурами, скорее нужны для лазерных сканирующих микроскопов, работающих с люминесценцией (многоцветной люминесценцией) или для микроэлектроники. Т.е. на тех объектах, где для исследований требуется небольшая глубина резкости, иначе на тонких слоях. Поэтому прежде, чем покупать объектив : 1) необходимо оценить задачу, которую должны решить объективы; 2) оценить фирму-производитель с точки зрения технологического оснащения, косвенным признаком которого является цена (следует уточнить и  не у одного продавца, цену на выбранный объектив). Так что пока в мире мало, что меняется. Жду не дождусь, когда отечественное производство микроскопов начнёт потихонечку поднимать голову, правда, это произойдёт не скоро, слишком много надо создавать и, прежде всего, научные и инженерно- технологические кадровые ресурсы.       
10.02.2021 20:25, Оборина Ирина Валерьевна, Санкт-Петербург
Доброе время суток,Ольга Владимировна,подскажите,пожалуйста,есть ли курсы для начинающих по работе с микроскопом?Заранее благодарю

Ответ
Я очные курсы закончила вести весной прошлого года. Сейчас ещё осталась возможность дистанционного обучения в СПбГУ. Предполагалось, что, если наберётся курс, то его можно будет провести весной в апреле-мае. О них можно уточнить. Это ссылка на сайт СПбГУ https://spbu.ru/postupayushchim/programms/dopolnitelnyeprogrammy/osnovy-sovremennoy-svetovoy-mikroskopii Контактное лицо в СПбГУ Марина Анатольевна Мягкова-Романова, к.х.н., директор ЦДОП СПбГУ по направлениям математика, процессы управления, физика и химия р.т. (*-812) 324-12-52 моб.т. : +7-921-744-17-72
08.02.2021 21:18, Юрий, Одесса
Здравствуйте уважаемая Ольга Владимировна! Я работаю на кафедре материаловедения университета. К сожалению работать приходится на еще советском оборудовании типа МИМ-7, МИМ-8, ММР-2Р, МБИ-11. Возможно Вам известны успешные методы их модернизации для работы с ПЭВМ. Буду очень благодарен за электронные варианты Ваших книг, особенно "Техническая микроскопия", т.к. ознакомится с ними другим путем не представляется возможным.

Ответ
Конечно, есть возможность модернизации этих микроскопов, например, за счёт установки в окулярную трубку окулярной камеры, главное, чтобы оптика микроскопа была готова к такой установке И ещё. Внутренний диаметр окулярной трубки должен соответствовать внешнему посадочному диаметру камеры. Сенсор камеры должен совпадать с плоскостью изображения объектива. Но, т.к. окулярная трубка в микроскопе, например МИМ 8, перемещается, то есть возможность отъюстировать это положение. И , конечно, осветительная система должна быть настроена соответствующим образом. Насадки заменять проблематично, можно качество изображения ещё больше ухудшить. У меня вышел учебник "Техническая микроскопия" в издательстве ЛАНЬ. Есть выход на электронный вариант и бумажный. Можно обратиться напрямую в редакцию: Елена Владимировна Баженова заведующая редакцией инженерно-технической литературы издательства "ЛАНЬ". 196105, Санкт-Петербург, проспект Юрия Гагарина, д. 1, лит. А Тел.: (812) 336-90-92, (812) 412-92-72, (812) 336-25-09 Тел.(бесплатная линия): (800) 700-4071 Факс : (812) 336-25-09 Internet: http://www.lanbook.com/ e-mail: it@lanbook.ru PS. Моё письмо к вам вернулось, поэтому связь, только через данный сайт, а значит без приложений.
05.02.2021 03:45, Никитина Татьяна Васильевна, Республика Татарстан г. Лениногорск
Здравствуйте, Ольга Владимировна! Я работаю биологом в КДЛ, работаю с микроскопом уже много лет, недавно мне достался микроскоп от коллеги, которая ушла на пенсию, zeiss standard 20. Очень хороший микроскоп, ещё западной Германии. Смотрю препараты объективом 90, все клетки просматриваются на все 100%, но когда перехожу на объектив 10 начинает мерцать лампа, если ее убавить и почти ничего не видеть, то мерцание исчезает! В чем может быть причина? Спасибо!

Ответ
  1. Можно предположить нестабильную работу блока питания или проблема потенциометра, регулирующего яркость. 2. Как вариант, можно предложить  воспользоваться светофильтром (конверсионным или нейтральным) или матовым стеклом  при работе с объективом 10х и максимальной яркости; при работе с объективом максимального увеличения — светофильтр убирается. Светофильтр кладётся на выходное отверстия осветителя на основании микроскопа.
26.01.2021 21:16, Андрей, Москва
Добрый день. Возможно ли использовать конденсор темного поля ОИ-13 на микроскопе МикМед-5 (Биомед-5) хотя бы с частью объективов или переделав его? Посадочный диаметр у него такой же, а вот по высоте он немного ниже рекомендованного КОН-5.

Ответ
1) Конденсор ОИ 13 предназначен для реализации тёмного поля в объективах с высотой 33 мм (разработка 70-х годов). КОН — 5 предназначен для объективов с высотой 45 мм. Реализация тёмного поля связана с проекцией диска тёмного поля в выходной зрачок объектива, который так или иначе связан с высотой объектива. КОН-5, как и ОИ13 являются конденсорами тёмного поля с высокой числовой апертурой и работают с иммерсией, т.е. это иммерсионные конденсоры, в противном случае они не позволят получить тёмное поле с объективом  100ХМИ. Если при работе с сухими объективами при перемещении конденсора вверх-вниз можно постараться хоть как-то перекрыть световой поток, идущий в объектив, то для иммерсионного объектива это проблема - разница в рабочем расстоянии сразу скажется.  В противном, допустимо-не допустимо, определяется задачей. Для медиков и для ответственных исследований — такая замена недопустима. Если хотите поэкспериментировать, и денег у вас, как говориться, «куры не клюют», то , наверное, можно рискнуть — авось все допуски сложатся и что-то получится...
25.01.2021 15:00, Николай, Киев
Здравствуйте Ольга Владимировна! Стою перед выбором из этих этих двух микроскопов Мікроскоп Ulab XY-B2T LED https://opticalmarket.com.ua/ua/mikroskop-ulab-xy-b2t-led.html либо MICROmed Evolution ES-4130 https://micromed.ua/shop/produkciya_dlya_laboratoriy/laboratornoe_oborudovanie/mikroskopi/mikroskopy-biologicheskie/mikroskop-biologicheskij-es-4130-evolution-micromed/ Первый укомплектован 5-ю объективами но окуляры только WF10x. Второй микроскоп укомплектован окулярами WF10х, WF16х и дешевле немного. В чем отличия этих микроскопов? Прошу помощи в выборе

Ответ
Новый микроскоп, который вы привели для сравнения, также не имеет возможности для расширения функциональных возможностей за счёт применения модулей разных методов контрастирования, как в предыдущей паре. Расширение увеличения за счёт применения комплектов окуляров выгоден, если вы только смотрите в бинокулярную насадку в светлом поле и расширяете диапазон наблюдения для объективов малого и среднего увеличения. 
22.01.2021 01:50, Николай, Киев
Здравствуйте Ольга Владимировна! Спасибо Вам за ответ. Ещё хотел бы узнать про микроскопы с планахроматами-безконечность. Они намного лучше от обычных планахроматов по качеству изображения? Микроскопия для меня будет хобби в свободное время. Я хочу брать что-то хорошее, что бы потом не пришло разочарование. Из этих двух микроскопов что будет лучшее? Ulab XY-B2B LED https://opticalmarket.com.ua/mikroskop-ulab-xy-b2b-led.html Sigeta MBX-4 40x-1000x Bino Infinity https://opticalmarket.com.ua/mikroskop-sigeta-mbx-4-40x-1000x-bino-infinity.html Или нет смысла мне переплачивать если я не являюсь специалистом и взять что-то на подобии MICROmed Fusion FS-7620? Ещё хотелось бы почитать Вашу книгу "С микроскопом на "ТЫ". Как её можно приобрести в Украине?

Ответ
По всем параметрам рабочий микроскоп с настраиваемым Кёлером  Ulab XY-B2B LED лучше, т.к. имеет и поле больше (22 мм) и больше возможностей для расширения функциональных возможностей при покупке дополнительных принадлежностей, что, конечно, для любителя Клондайк для  изучения микромира.   Правда, объективы среднего качества и сборка может быть не ахти. Желательно иметь возможность возврата в случае чего . Но это свойственно всем китайским микроскопам этого класса сложности.